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    3Helix:熒光F-CHP

    發布者:艾美捷科技    發布時間:2024-03-08     
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    CHP在三維膠原培養中展示了癌細胞蛋白酶水解引起的細胞周基質轉換過程,而不需要使用合成熒光基質和基因修飾細胞。CHP可以在分子水平上檢測和定位膠原組織的機械損傷。CHP還可以用于評估脫細胞胞外基質的膠原損傷。CHP可在SDS-PAGE凝膠中特異性地顯示膠原條帶,而無需進行western轉印。

     

    CHP通過與SDS變性的膠原鏈進行三螺旋雜交,并在電泳過程中加熱,從而實現對SDS-PAGE凝膠中膠原帶的簡便、敏感和特異性檢測[1]。簡單的程序消除了對western blot的需要(例如,蛋白質轉移到膜和阻斷),節省了時間,精力和材料。

    SDS-PAGE.png

      

    熒光F-CHP直接在SDS-PAGE凝膠中可靠地測量I型膠原蛋白的稀釋系列,并檢測到含有少至5ng蛋白質的條帶(左)。CHP可識別多種膠原類型(中),由于其中性和親水性,對ECM(中)和細胞裂解液(右)中的非膠原分子沒有親和力。

    用 Typhoon Imager 熒光成像記錄(λex: 488 nm). 圖片參考文獻[1] .

     

    此外,CHP可用于替代不成功的膠原抗體或常規膠原染色檢測高度變性組織中的膠原蛋白[1]。 下圖顯示了完全加熱的豬韌帶切片中完整的膠原含量,通過F-CHP或B-CHP可見(進一步通過酶標NeutrAvidin檢測)。CHP染色對膠原蛋白的特異性比傳統的膠原蛋白染色(如Sirus Red)更高,后者依賴于膠原蛋白結合的正電荷,可以對其他堿性氨基酸含量高的蛋白質進行非特異性染色[2]。

    CHP.png

     

    Reference

    1.Direct detection of collagenous proteins by fluorescently labeled collagen mimetic peptides. Bioconjugate Chemistry(2013) 

    2.Sirius red and acid fuchsin staining mechanisms. Biotechnic & Histochemistry (1998) 73, 71–77.

     

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