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    Advanced BioMatrix:細胞外基質(ECM)蛋白篩選試劑盒

    發布者:艾美捷科技    發布時間:2024-03-01     
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    活體組織可以被視為由細胞和液體構成的動態網狀結構。盡管組織中的細胞彼此非常接近,但它們并不是簡單地緊密纏繞在一起的。相反,它們在細胞外網狀結構的幫助下被間隔開來。細胞外基質(Extracellular matrix,ECM)是一種動態的三維大分子網絡,為細胞和組織提供結構支持。細胞外基質不僅填充著細胞之間的空間,還通過與細胞表面的受體相互作用,調節細胞的功能和行為,如細胞遷移、細胞黏附、信號傳導和組織修復。在細胞外基質中,蛋白質是重要的組成部分之一。它們可以形成纖維蛋白網絡,提供支持和機械強度,使細胞能夠維持其結構。此外,蛋白質還可以通過與其他細胞外分子和受體相互作用,參與信號傳導和細胞間的相互作用。細胞外基質由三類主要生物分子組成:

    1. 結構蛋白:例如膠原蛋白(collagen)、彈性蛋白(elastin)。

    2. 非結構蛋白:例如纖維連接蛋白(fibronectin)、各種層粘連蛋白(laminin)和各種整合蛋白(integrin)。

    3. 蛋白聚糖:這些蛋白由一個蛋白質核心組成,長鏈重復的二糖單元(稱為糖氨基聚糖,GAG)附著在上面,形成ECM極其復雜的高分子量組分。


    ECM.jpg


    細胞外基質蛋白種類多樣,不同蛋白間還可以互相組合為體外細胞培養創造有利條件。但是也正是因為這種多樣性,也為體外培養細胞選擇合適的細胞外基質蛋白帶來巨大挑戰。作為2D/3D細胞培養專家,Advanced BioMatrix為您帶來 ECM Select?Array試劑盒,允許您在36種ECM蛋白組合上培養細胞,幫助您找到適合您細胞的細胞外基質(ECM)蛋白。

    ECM Select Array.jpg

     

    貨號

    5170

    名稱

    ECM Select? Array Kit Ultra-36 細胞外基質(ECM)蛋白篩選試劑盒

    應用

    細胞外基質篩選陣列,可幫助您找到適合您細胞的細胞外基質(ECM)蛋白(已成功應用于MCF-7、CHO、HUVEC、成纖維細胞、MG-63、Jurkat細胞等細胞系,以及小鼠心臟祖細胞、新生大鼠心肌細胞、人寡突觸前體細胞等原代細胞,使用此方案。)

    說明書

    下載

    5170.png

     

    實驗流程:

    1. 將細胞接種到載玻片上

    1.1在5ml完整的培養基中準備250000個所需細胞(50,000個細胞/毫升)。

    1.2從-20℃的冰箱中取出ECM Select? Array Kit Ultra-36,并放置在無菌層流罩下。打開鋁箔袋并取出其中的組分。首先,從塑料袋中取出細胞培養板,并取下蓋子。然后打開載玻片支架上的蓋子,輕輕取出載玻片。將載玻片放入細胞培養板的一個小隔間中。在取出載玻片時要小心,使用無菌技術,如戴無菌手套或使用無菌鑷子,并只觸摸載玻片的邊緣。確保印刷的斑點面朝上(載玻片上的數字和字母應清晰可見)。

    1.3在載玻片上加入5ml無菌PBS。確保整個載玻片浸泡在PBS溶液中,避免在載玻片下方困住氣泡。輕輕搖動載玻片幾次,然后吸出PBS溶液。注意:不要觸摸載玻片表面。

    1.4加入5ml所需的培養基(用于細胞培養的相同培養基),確保整個載玻片浸泡在培養基中。輕輕搖動載玻片幾次,然后吸出培養基溶液。注意:不要觸摸載玻片表面。

    1.5 通過輕輕上下移液混合準備好的25萬個細胞,然后立即將細胞直接加到載玻片上。在向載玻片上分配細胞時,同時來回移動移液管,均勻分布細胞。注意:不要觸摸載玻片表面。將蓋子放回培養皿上。

    1.6小心地將含有載玻片的4孔板轉移到孵育箱中,在37℃、5% CO2條件下過夜培養細胞(至少12小時,以確保細胞有效附著,最長可達3天)。

    注意:從載玻片支架上取下載玻片時,載玻片表面可能可見陣列斑點。用PBS/培養基洗滌后,這些斑點可能會消失。這是正?,F象,不會影響ECM陣列的性能。

    注意:對于細胞系,12小時應足以看到細胞附著。對于新鮮從組織中分離出的細胞或之前被冷凍的細胞,可能需要最多2天才能看到明顯的細胞附著。

    注意:如果需要進行細胞增殖研究,請減少細胞數量,以便在斑點上留出額外空間供細胞分裂。建議根據細胞的大小和形態,從10萬到15萬個細胞開始。細胞越大,所需的細胞數量就越少。



    2. 在載玻片上清洗和觀察細胞

    2.1經過至少12小時的孵育后,從培養箱中取出培養板,將培養板放在相差顯微鏡下觀察,從5倍物鏡開始。輕輕來回移動培養板,區分非粘附的漂浮細胞和附著細胞。
    注意:由于ECM Select?載玻片上的水凝膠表面具有不易粘附的特性,細胞會優先附著到打印有適當細胞外基質的斑點上。細胞被限制在斑點內。

    2.2吸去非粘附的漂浮細胞,確保不擾動載玻片表面。每次用5ml培養基洗滌載玻片兩次,然后將載玻片留在5ml培養基中。

    2.3在相差顯微鏡下觀察每個斑點塊的細胞附著情況。每個塊代表一個具有9個復制點的唯一ECM。

    2.4在這個階段,細胞可以固定,也可以在載玻片上再培養3天。

     

    3. 在載玻片上固定細胞

    3.1通過吸去培養基,去除載玻片上的培養細胞。用含Ca2+和Mg2+的冷1倍Hank's平衡鹽溶液(HBSS)兩次洗滌載玻片上的細胞,每次用5ml。

    3.2通過在1倍PBS溶液中加入4%的冷聚甲醛(PFA)來固定載玻片上的細胞。將載玻片放入4℃的PFA溶液中5分鐘,然后在室溫下額外固定10分鐘。

    3.3去除PFA溶液,然后用1倍HBSS溶液每次洗滌載玻片兩次,每次用5ml。載玻片可以存放在4℃的1倍HBSS溶液中以備將來染色,或者可以立即處理。

     

    4. 在載玻片上進行細胞核和免疫染色

    4.1可以使用許多可用的核染色試劑對載玻片上的細胞進行染色,如DAPI、PoPo-3、DraQ等。

    4.2對于特定抗體染色,請按照制造商的說明進行免疫細胞化學稀釋建議。

    4.3完成染色后,用5ml細胞培養水每次洗滌載玻片兩次,每次5分鐘。然后將載玻片從培養皿中取出,放在暗處的架子上晾干。

    4.4載玻片可以直接放入熒光顯微鏡中觀察。

    注意:不要使用任何封片介質,如Vectashield。

    注意:不要使用倒置位置進行觀察,這通常用于油鏡頭。

    MCF7.jpg

    ECM Select? Array Kit單個條件(9個復制點)的細胞附著示例。左圖為mcf7細胞。右圖為人肝細胞。圖像是在Leica DMIL顯微鏡系統的5倍物鏡上拍攝的。

     

    文獻案例:

    為了更好地了解血管肉瘤在體外生長條件,該團隊專注于它們培養中的一個特定方面——與細胞外基質的粘附,以便確定可能促進和/或增強它們在組織培養中生長的附著基質。數據表明,血管肉瘤的細胞外基質含有與非疾病內皮細胞相似的蛋白質組成。利用Advanced BioMatrix的ECM Select? Array Kit試劑盒,判斷血管肉瘤細胞系對不同細胞外基質蛋白的附著情況,血管肉瘤細胞系對膠原I或纖維連接蛋白等基質表現出強烈的附著偏好,對膠原IV、層粘蛋白或原彈性蛋白的偏好較少。在優選的細胞外基質基質上生長促進了血管肉瘤細胞系的有絲分裂信號傳導,并增加了它們的增殖。這些發現提供了洞察力,可能有助于更成功地在體外培養血管肉瘤細胞系。

    ECM Select Array Kit-3.png

    ECM Select Array Kit-1.jpg

     

    哺乳動物細胞存在于體內獨特的微環境中,影響它們的行為(增殖、分化、死亡等)和功能。當細胞在體外培養時,有必要重現這種微環境,以實現生理相關的生長。在影響細胞在體內行為的許多因素中,細胞外基質(ECM)在確定細胞功能方面發揮著重要作用。目前,找到適合細胞培養的合適的ECM是一個需要大量細胞、以及顯著的時間和成本投入的試錯過程。ECM Select? Array Kit Ultra-36允許在短時間內用少量細胞并行篩選36種ECM及其組合。


    美國Advanced BioMatrix是3D組織培養、細胞檢測和細胞增殖等領域實驗解決方案的佼佼者,在分離、純化、凍干、細胞培養和蛋白檢測、多肽粘附、附著因子、基質硬度和其他3D matrix 產品開發方面有著豐富的經驗。

    產品競爭優勢:

    1. 提供高純度和成分確定的胞外基質;

    2. 超過1000余篇文獻引用PureCol 膠原產品,品質非常均一;

    3. 在3D培養基領域可提供全面的產品線;

    4. 唯1可提供特異性剛性有機硅基板的公司(CytoSoft);

    5. 唯1可提供可溶性絲纖蛋白的供應商(可運用于多種3D培養);

    6. 如果客戶首次接觸3D膠原凝膠,Advanced BioMatrix還是唯1的預制膠原蛋白(PureCol EZ gel)供應商。

     

     ECM Select Array Kit-2.jpg

     

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